SM10 λpir Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品訂購(gòu)：更大包裝或產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題

菌株描述

SM10 λpir是從SM10菌株改造而來(lái)，SM10是S17-1菌株的衍生菌，后者是構(gòu)建用于高效接合轉(zhuǎn)移的經(jīng)典菌株。SM10 λpir菌株適用于作為攜帶R6K復(fù)制起始位點(diǎn)（ori）的穿梭質(zhì)粒或自sa性質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移供體菌株（donor strain），常用于基因敲除、細(xì)菌遺傳學(xué)操作和轉(zhuǎn)座子誘變。

SM10 λpir菌株的主要特征：

j 接合轉(zhuǎn)移功能：含整合在染色體上的RP4接合轉(zhuǎn)移系統(tǒng)基因（RP4-2-Tc::Mu），使其能高效的將攜帶oriT（轉(zhuǎn)移起始位點(diǎn)）的質(zhì)粒通過(guò)接合作用轉(zhuǎn)移到受體菌（recipient strain），比如：沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、假單胞菌、耶爾森菌、霍亂弧菌等其他革蘭氏陰性菌。

k λpir溶原菌：表達(dá)pir蛋白（pir基因產(chǎn)物），pir蛋白是R6K質(zhì)粒復(fù)制起始位點(diǎn) (oriR6或oriV)的特異性復(fù)制起始蛋白，只有表達(dá)pir蛋白的宿主細(xì)胞才能復(fù)制帶oriR6K復(fù)制起點(diǎn)的質(zhì)粒。

l recA1：缺失同源重組能力，維持質(zhì)粒在供體菌中的穩(wěn)定性。

m 鏈mei素敏感:便于接合后利用鏈mei素進(jìn)行受體菌的反向篩選（SM10本身對(duì)鏈mei素敏感，然而許多受體菌具鏈mei素抗性）。

n 選擇性標(biāo)記（抗性標(biāo)記）: 染色體上含卡那mei素抗性基因（Km?）

SM10 λpir菌株基因型：thi thr leu tonA lacY supE recA::RP4-2-Tc::Mu (Km?) λpir

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌SM10 λpir菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

產(chǎn)品包裝

保存與運(yùn)輸條件：

保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1） 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存。

2） 最好在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞，不可在冰上放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3） 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，需在相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

4） 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最di。

5） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。

6） SM10 λpir菌株具卡那抗性，不能用于攜帶卡那抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

7） 后續(xù)進(jìn)行陽(yáng)性菌落的擴(kuò)繁和高純質(zhì)粒的獲取，推薦選用TB培養(yǎng)基（Terrific Broth），優(yōu)于LB或SOC。

8） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2min。此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

3） 向每個(gè)離心管中加700 μl無(wú)菌的LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)過(guò)夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過(guò)離心（5000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

相關(guān)產(chǎn)品

附錄S17-1 λpir(pSC189) and SM10 λpir(pSC189)供體菌的構(gòu)建

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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